Celthy siRNA/miRNA体外转染试剂-克隆与表达-试剂-生物在线

Celthy siRNA/miRNA体外转染试剂

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产品名称： Celthy siRNA/miRNA体外转染试剂

英文名称： Celthy siRNA/miRNA In vitro transfection reagent

产品编号： C130004

产品价格： null

产品产地：美国

品牌商标： Arcegen

更新时间： 2025-07-08T08:58

使用范围： null

规格	价格
1ml	3200.0
0.5ml	1800.0
100ul	260.0

上海魔兜儿生物科技有限公司

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产品详情

产品简介 Celthy siRNA/miRNA体外转染试剂可对广泛的细胞系中提供优异的高转染效率，适用于siRNA/miRNA介绍的基因研究。该转染试剂是专效的PEI阳离子、两性分子转染试剂，可与siRNA/miRNA形成阳离子复合物，并通过内吞作用进入细胞，再通过胞内质子交换作用，使得复合体释放外源siRNA/miRNA进入细胞质。本产品具有如下特点： 适用于siRNA和miRNA的转染； 能实现1 nM的siRNA超过90%的表达效率，避免了脱靶效应； 适用于多种细胞转染，包括Hela、MCF-7、HepG2、CHO等贴壁细胞； 适用于难以转染的悬浮细胞系（如：K562或THP-1细胞），可达到80%的沉默效率； 适用于部分原代细胞（如：原代人成纤维细胞、原代人肝细胞等），可达到80%的沉默效率。   运输与保存方法 冰袋（wet ice）运输。产品2-8 ℃保存，一年有效。不可冷冻！   注意事项  1）整个实验过程使用无RNA酶和无热原性的材料，如离心管、枪头、缓冲液。 2）转染前，确保siRNA是经过PAGE纯化和脱盐处理过的，高纯度的siRNA或者miRNA有助于获得较高的转染效率。 3）PEI阳离子转染试剂应该在2-8 ℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，否则可能会导致PEI挥发，降低转染效率。 4）转染前一天，确保接种贴壁细胞密度在30%-50%左右，对于一些小细胞和生长缓慢的细胞，接种密度可适当扩大2倍。 5）转染前，确保siRNA/miRNA基因沉默表达不会影响细胞活力。 6）该产品只适合体外转染，不能用于体内转染。 7）本产品仅作科研用途！   操作流程 一．贴壁细胞转染（以24孔板和终浓度50 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表1） 接种贴壁细胞 1.为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，接种细胞密度建议30%-50%左右，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。 2.按照以下体系配制siRNA-PEI或miRNA-PEI核酸转染试剂阳离子复合物：  1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM培养基）稀释30 pmoles siRNA，混匀。 2）立刻向100 μL的siRNA中加入2-4 μL的转染试剂，旋涡10秒，充分混匀。 3）在室温下孵育10 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。 【注】：孵育时间不要超过30min 4）在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入500 μL新鲜预热的完全培养基。 5）直接将100 µL siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。最终体积为600 µL ，siRNA终浓度为50 nM。 6）37 ℃，5% CO2培养箱培养，直至目的基因表达。建议一般siRNA表达水平通常在24-72 h，蛋白表达水平在48-96 h。   表1 siRNA终浓度为50 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值（贴壁细胞） <table style="width: 100%;" border="1" cellspacing="1"> <tbody> <tr> <td> 培养皿 </td> <td> 每孔培养基体积 </td> <td> 稀释用无血清培养基 </td> <td> siRNA物质的量(pmoles) </td> <td> 转染试剂体积（µL） </td> <td> 加入复合物后培养基总体积 </td> </tr> <tr> <td> 96孔板 </td> <td> 125 µL </td> <td> 50 µL </td> <td> 8.75 </td> <td> 0.5-1.5 </td> <td> 175 µL </td> </tr> <tr> <td> 24孔板 </td> <td> 500 µL </td> <td> 100 µL </td> <td> 30 </td> <td> 2-4 </td> <td> 600 µL </td> </tr> <tr> <td> 12孔板 </td> <td> 1 mL </td> <td> 200 µL </td> <td> 60 </td> <td> 4-8 </td> <td> 1.2 mL </td> </tr> <tr> <td> 6孔板 </td> <td> 2 mL </td> <td> 200 µL </td> <td> 110 </td> <td> 8-16 </td> <td> 2.2 mL </td> </tr> <tr> <td> 25cm2培养瓶 </td> <td> 4 mL </td> <td> 400 µL </td> <td> 220 </td> <td> 15-25 </td> <td> 4.4 mL </td> </tr> </tbody> </table> 注：贴壁细胞培养密度与各细胞倍增时间有关，确保细胞转染时细胞密度在60-80%即可。 二．悬浮细胞转染（以24孔板和终浓度50 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表2） 接种细胞 1.为了优化悬浮细胞转染条件，与贴壁细胞相比，需要降低悬浮细胞培养基的体积。根据培养皿大小和完整培养基的体积，推荐接种悬浮细胞的数量如下表2所示。 表2 siRNA终浓度为50 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值（悬浮细胞） <table style="width: 100%;" border="1" cellspacing="1"> <tbody> <tr> <td> 培养皿 </td> <td> siRNA物质的量(pmoles) </td> <td> 转染试剂体积（µL） </td> <td> 转染当天接种细胞数 </td> <td> 形成复合物培养基体积 </td> <td> 转染前悬浮细胞的体积 </td> <td> 转染4-6h后另加入培养基的体积 </td> </tr> <tr> <td> 96孔板 </td> <td> 5 </td> <td> 0.5-1.5 </td> <td> 1×104~ 2×104 </td> <td> 50 µL </td> <td> 50 µL </td> <td> 100 µL </td> </tr> <tr> <td> 24孔板 </td> <td> 15 </td> <td> 2-4 </td> <td> 1×105 ~ 2×105 </td> <td> 100 µL </td> <td> 200 µL </td> <td> 700 µL </td> </tr> <tr> <td> 12孔板 </td> <td> 35 </td> <td> 4-8 </td> <td> 2×105 ~ 4×105 </td> <td> 200 µL </td> <td> 500 µL </td> <td> 1 mL </td> </tr> <tr> <td> 6孔板 </td> <td> 60 </td> <td> 8-16 </td> <td> 5×105 ~ 2×106 </td> <td> 200 µL </td> <td> 1 mL </td> <td> 2 mL </td> </tr> <tr> <td> 25cm2培养瓶 </td> <td> 120 </td> <td> 15-25 </td> <td> 2×106~ 5×106 </td> <td> 400 µL </td> <td> 2 mL </td> <td> 4 mL </td> </tr> </tbody> </table>   2.按照以下体系配制siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物：  1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM培养基）稀释15 pmols siRNA，混匀。 2）向100 μL的siRNA中加入2-4 μL的转染试剂，立刻旋涡10秒，充分混匀。 3）在室温孵育15 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。 【注】：孵育时间不要超过30 min 4）在每孔200 μL细胞悬浮液中，加入100 μL的siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物，轻轻混匀。最终体积为300 µL，siRNA终浓度为50 nM。 5）37 ℃，5% CO2培养箱培养4-6 h后，再加入700 µL完全培养基，轻轻摇动培养板使其混匀。 6）继续放入培养箱中孵育，直至目的基因表达。建议一般siRNA表达水平通常在24-72 h，蛋白表达水平在48-96 h。 【注】：为了优化内源性基因沉默，siRNA浓度需要做梯度摸索。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整。  <ul style="color: #000000; font-weight: 400;"> <li>miRNA转染操作流程 该转染试剂也适合转染miRNA，转染贴壁细胞和悬浮细胞的具体操作请参考siRNA的操作流程。</li> </ul>